筑起机体免疫长城

【产品简介】
兔瘟病毒免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理，单克隆抗体先与病毒反应，然后间接的与荧光抗鼠二抗反应，用这种荧光抗体检测兔瘟病毒或者细胞内的表达VP60蛋白。
【产品内容】 【备用的器材】
哺乳动物或者293细胞
排枪
排枪配套使用的枪头
加样槽
离心管
96孔细胞培养板两块
【试剂配置】
6%DMEM培养基：DMEM培养基+6%新生牛血清
2%DMEM培养基：DMEM培养基+2%新生牛血清
荧光二抗工作液：将浓缩荧光二抗按照1:100稀释（用样品稀释液稀释100倍，现用现配）
【操作步骤】
用6%DMEM培养基将哺乳动物细胞或者293铺12孔板一个（细胞密度为1*104/ml），次日Lipo2000转染表达VP60蛋白。
接毒步骤如下：
1. 弃掉培养基，加入OPTI-MEM培养基，根据说明书进行转染，转染剂量为1ug质粒/孔。
2. 转染4h后，更换2%DMEM培养基，放置于37℃ CO2培养箱培养24-48h，使蛋白获得表达，之后进行IFA检测。
荧光测定步骤如下：
1.弃掉培养板上清，每孔加入300微升-20℃的固定液，放入-20℃静置20分钟，弃掉上清，不用拍板。
3.洗涤3次，吸干水分，不用拍板。
4.每孔加入一抗工作液300ul，盖上盖板膜，放置于37℃ 60分钟后，洗涤3次，吸干水分，不用拍板。
5.每孔加入荧光二抗工作液300 ul，盖上盖板膜，放置于37℃ 30分钟后，洗涤3次，吸干水分，不用拍板。
6.观察荧光显微镜，记录蛋白的表达。
【注意事项】
（1）切记设转染空载体的细胞对照。
（2）样稀清洗与加样时要温柔，并从同一个位点加入。
（3）加样槽用前请用一次性塑料手套套住，加不同溶液时更换手套，防止不同溶液的交叉污染。
（4）配制好的荧光二抗避光保存，现配现用，固定液放-20℃ 1h后再使用。
（5）操作过程中的移液、计时和洗涤必须精确，以免影响结果。
【贮藏与有效期】
低温避光保存，有效期为12个月。
【产品规格】2*96T