小反刍兽疫竞争ELISA抗体检测试剂盒使用说明书

     更新时间:2019-06-19       浏览量:
【产品名称】
通用名称:小反刍兽疫竞争ELISA抗体检测试剂盒
英文名称:Competition ELISA test kit for Detecting Peste des Petits Ruminants virus antibodies
【用途】 用于检测羊血清中的小反刍兽疫抗体。
规格】 2块96孔ELISA板。
【储藏与有效期】 2~8℃保存,有效期9个月。
【试剂盒组成】
名称 数量
抗原包被板(PPRV) 2块(96孔)
20×洗涤液 1瓶(30mL/瓶)
PPRV阴性血清 1管(200uL/管)
PPRV阳性血清 1管(200uL/管)
酶标单抗5× 2管(1mL/管)
TMB底物 1瓶(10mL/瓶)
终止液 1瓶(10mL/瓶)
样品稀释液 1瓶(14mL/瓶)
说明书 1份
【溶液配制】 洗涤液(1×PBST):将本试剂盒配备的20×洗涤液用无离子水或超纯水作1:20稀释。
将酶标单抗5×用样品稀释液做5倍稀释配制工作浓度的酶标单抗1×。
【实验准备】所有试剂使用前恢复至室温(25℃左右),加液前充分摇匀。
【操作步骤】
PPRV抗原包被板上阴性血清N、阳性血清P、样品稀释液Cm和样品S的分布如图所示:

1.加样:每块ELISA反应板均需分别设置2孔阴性对照(A1B1)、2孔阳性血清对照(C1D1),2孔稀释液对照(E1F1),加样如下:在A1和B1孔内分别加入50uL/孔PPRV阴性对照血清,在C1和D1孔内分别加入50uL/孔PPRV阳性对照血清,在E1和F1孔内分别加入50uL/孔的样品稀释液。其他孔为被检样品孔,每孔先加入25uL的样品稀释液,再分别加入25uL的被检血清。轻轻震匀后于37℃温育60分钟。
2.甩掉包被板孔中的液体,每孔加入约300μL洗涤液1×,洗板4遍,拍干后每孔加入50μL酶标单抗1×,震荡混匀, 37℃温育30分钟。
3.甩掉包被板孔中的液体,每孔加入约300μL洗涤液,洗板4遍,拍干,加入TMB底物,50uL/孔。37℃避光温育15分钟。
4.终止读数:在上述每孔加入50uL终止液后在酶标仪450nm波长处,测定光吸收值。
【结果判定】
1. PPRV阴性血清的平均OD值即ODNC;PPRV阳性血清的平均OD值即ODPC;酶标单抗平均OD值即ODCm;样品的OD值即ODS 。按照以下方法计算抑制率PI
阳性血清抑制率即 PIPC= [1-ODPC/ODCm)] ×100%
阴性血清抑制率即 PINC= [1-ODNC/ODCm)] ×100%
样品血清抑制率即 PIS= [1-ODS/ODCm)] ×100%
判定标准
1.当PIPC 大于60%,PINC小于40%时试验成立,否则该次检测结果无效,否则重新进行试验。
2.被检样品PIS大于50%时,判为小反刍兽疫抗体阳性;被检样品PIS≤50%时,判为小反刍兽疫抗体阴性。
【注意事项】
1. 所有试剂使用前恢复至室温(25℃左右),以免温度过低影响抗原抗体反应。
2. 实验前应用温度计检查温箱温度,温度过高或过低影响OD值高低。
3. 包被板反应时严禁堆叠放置,应该平铺且板间有空隙,不要离温箱壁太近。
4. 实验所用移液器及设备应定期校准。
5. 采集的样品要新鲜,并且最好不要溶血。血清标本在2~8℃放置不要超过2天,室温不超过8小时,如需长时间放置应储存于-20℃。
6. 底物液和终止液对皮肤有刺激性,请带手套注意个人防护。 
【技术支持】 王金良                                   电话:0543-3403060
仅供兽医诊断使用



上一篇:犬细粒棘球绦虫抗原ELISA试剂盒使用说明书
下一篇:鸭传染性浆膜炎血清1型抗体ELISA检测试剂盒使用说明书
编辑:熊方方




最新动态
媒体报道
行业资讯