猪伪狂犬病毒抗体ELISA检测试剂盒使用说明书

     更新时间:2019-06-19       浏览量:
【产品简介】
        猪伪狂犬病(PR)是一种高度接触性、急性传染病,给国内养猪业造成巨大的损失。在猪伪狂犬的免疫预防工作中,接种了猪伪狂犬疫苗后,由于多种因素可能导致猪不产生或产生低水平猪伪狂犬病毒抗体。
        gD蛋白是PRV结构蛋白,是PRV的主要保护性抗原蛋白,可诱导机体产生保护性抗体。本试剂盒采用酶联免疫吸附试验检测猪血清中抗PRV gD蛋白抗体IgG。用于免疫猪伪狂犬疫苗后的抗体动态水平监测,指导免疫预防工作,评估猪场猪伪狂犬免疫状况,也可用于猪伪狂犬的流行病学调查。
【产品内容】
试剂盒主要成分  
包被板 96T×2
阳性对照  1ml×1
阴性对照  1ml×1
酶标结合物 20ml×1
样品稀释液  50ml×1
底物液  20ml×1
终止液 15ml×1
20×浓缩洗涤液 50ml×1
封口胶 2份
说明书 1份
【成分性状】 
包被板 96孔塑制微孔板,无色透明,干燥,无杂质吸附
酶标结合物 略带黄色澄明液体
阴、阳性对照 略带黄色澄明液体
样品稀释液 无色或略带黄色澄明液体
浓缩洗涤液 无色或略带黄色澄明液体
底物液 无色或微蓝色澄明液体
终止液 无色澄明液体,低温条件下可能会出现絮状沉淀
【用法与判定】 按以下步骤进行:
1、需要自备的器材
1.1 微量移液器;
1.2 微量移液器配套使用的枪头;
1.3 用来稀释洗涤液的500 ml量筒;
1.4 适用于检测96T微孔板的酶标仪;
1.5 用于稀释样品的1.5 ml Ep管;
1.6 蒸馏水或去离子水。
2、样品的制备  
用样品稀释液将待检血清样品进行50倍稀释(建议:4μl血清样品加入196μl样品稀释液中),样品加入包被板前要充分混匀,稀释不同待检样品注意更换枪头。
注意:制备血清用的血液样本应无溶血现象发生;②不能稀释阴性、阳性对照。
3、操作步骤 (﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀,所有试剂应平衡至室温
3.1  在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照;
3.2  在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照;
3.3  取100μl稀释好的待检样品加入相应孔中,并做好记录;
3.4  37℃孵育30min;
3.5  将各孔的液体弃入废液桶,每孔加250μl的洗涤液(试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶,需先溶解后,方可进行稀释)进行洗板,重复5次,每次30s;
﹡加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果,尽量将孔内洗涤液抛甩干净;
3.6  每孔加100μl酶标结合物;
3.7  37℃孵育30min;重复步骤3.5;
3.9  每孔加100μl底物液;
3.9  37℃孵育10min(避光显色)
3.10 每孔加50μl的终止液;
3.11 立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值,即OD450值。
4、试验有效性判断
4.1阴性对照:正常情况下,阴性对照OD450值≤0.3;
4.2阳性对照:正常情况下,阳性对照OD450值≥0.6;
4.3临界值(C.O.)的计算:临界值=0.18+阴性对照均值;阴性对照OD450值大于0.3时应舍弃,如所有阴性对照OD450值都大于0.3时须重复实验;阴性对照于0.05时以0.05计算。
4.4结果判定:检测样品OD450值≥临界值,判定该检测样品为阳性;检测样品OD450值<临界值,判定该检测样品为阴性。
【注意事项】
(1)待检血清样品数量过多时,应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后,再统一将血清样品加入酶标板中,使反应时间一致。
(2)试剂盒使用的过程中不要吸烟、喝水和吃东西。
(3)底物液和终止液对皮肤有刺激性,注意防护。
(4)底物液不要暴露于强光和任何氧化剂;使用洁净的玻璃和朔料容器处理底物液。
(5)所有试剂应在2~8℃存放;使用前恢复到室温,使用后放回2~8℃。
(6)注意防止试剂盒组分受到污染。
(7)不要使用超过有效期的试剂,不同批次试剂盒的组分不要混用。
(8)操作过程中的移液、时间和洗涤必须精确。
【规格与包装】96T×2
【贮藏与有效期】2~8℃避光保存,有效期为12个月
【联系人】 王金良                                   电话:0543-3403060
仅供兽医诊断使用



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编辑:熊方方




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