鼻气管炎鸟杆菌(ORT)ELISA抗体检测试剂盒使用说明书
更新时间:2019-06-14 浏览量:
【产品简介】鼻气管鸟杆菌(Ornithobacte riumrhino tracheale,ORT)可发鸡和火鸡的急性、高度接触性呼吸道传染病。该病以呼吸困难、生长障碍及严重的纤维素性化脓性肺炎和气囊炎为特征,并继发其它疾病的感染,导致鸡群出现大量死亡。目前该病在世界许多国家和地区的流行呈上升趋势,严重危害养禽业的发展。
ORT共有18个血清型,我国主要流行的是A、B 2个血清型,试剂盒选取A、B型的共同检测抗原为包被抗原,建立ORT ELISA抗体检测方法。用于免疫ORT疫苗后的抗体动态水平监测,指导免疫预防工作,评估鸡场鼻气管鸟杆菌疫苗免疫状况,也可用于鼻气管鸟杆菌病的的流行病学调查。
【产品内容】
【成分性状】
【用法与判定】 按以下步骤进行:
1、需要自备的器材
1.1 微量移液器;
1.2 微量移液器配套使用的枪头;
1.3 用来稀释洗涤液的500ml量筒;
1.4 适用于检测96T微孔板的酶标仪;
1.5 用于稀释样品的1.5ml Ep管;
1.6 蒸馏水或去离子水。
2、样品的制备
用样品稀释液将待检血清样品进行40倍稀释(建议:5μl血清样品加入195μl样品稀释液中),样品加入包被板前要充分混匀,稀释不同待检样品注意更换枪头。注意:①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生;②不能稀释阴性、阳性对照。
3、操作步骤 (﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀,所有试剂应恢复至室温)
3.1 在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照;
3.2 在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照;
3.3 取100μl经1:40稀释好的待检样品加入相应孔中,并做好记录;
3.4 37℃孵育30min;
3.5 将各孔的液体弃入废液桶,每孔加250μl的洗涤液(试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶,需先溶解后,方可进行稀释)进行洗板,重复3次,每次30s;
﹡加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果,尽量将孔内洗涤液抛甩干净;
3.6 每孔加100μl酶标结合物;
3.7 37℃孵育30min;重复步骤3.5;
3.8 每孔加100μl底物液;
3.9 37℃孵育10min(避光显色);
3.10 每孔加100μl的终止液;
3.11 立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值,即OD450值。
4、试验有效性判断
4.1阴性对照:正常情况下,阴性对照孔OD450值≤0.2;
4.2阳性对照:正常情况下,阳性对照孔OD450值≥0.4;
4.3结果判定:检测样品OD450值≥0.267,判定该检测样品为阳性;检测样品OD450值<0.238,判定该检测样品为阴性;0.238≤检测样品OD450值<0.267为可疑,建议重新样品检测。
【注意事项】
(1)待检血清样品数量过多时,应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后,再统一将血清样品加入酶标板中,使反应时间一致。
(2)试剂盒使用的过程中不要吸烟、喝水和吃东西。
(3)底物液和终止液对皮肤有刺激性,注意防护。
(4)底物液不要暴露于强光和任何氧化剂;使用洁净的玻璃和朔料容器处理底物液。
(5)所有试剂应在2~8℃存放;使用前恢复到室温,使用后放回2~8℃。
(6)注意防止试剂盒组分受到污染。
(7)不要使用超过有效期的试剂,不同批次试剂盒的组分不要混用。
【规格与包装】96T×2
【贮藏与有效期】2~8℃避光保存,有效期为6个月
【联系人】 王金良 电话:0543-3403060
ORT共有18个血清型,我国主要流行的是A、B 2个血清型,试剂盒选取A、B型的共同检测抗原为包被抗原,建立ORT ELISA抗体检测方法。用于免疫ORT疫苗后的抗体动态水平监测,指导免疫预防工作,评估鸡场鼻气管鸟杆菌疫苗免疫状况,也可用于鼻气管鸟杆菌病的的流行病学调查。
【产品内容】
试剂盒主要成分 | 数 量 |
包被板 | 96T×2 |
阳性对照 | 1ml×1 |
阴性对照 | 1ml×1 |
酶标结合物 | 20ml×1 |
样品稀释液 | 20ml×2 |
底物液 | 20ml×1 |
终止液 | 20ml×1 |
20×浓缩洗涤液 | 25ml×1 |
封口胶 | 2份 |
使用说明书 | 1份 |
包被板 | 96孔塑制微孔板,无色透明,干燥,无杂质吸附 |
酶标结合物 | 略带黄色澄明液体 |
阴、阳性对照 | 略带黄色澄明液体 |
样品稀释液 | 略带黄色澄明液体 |
浓缩洗涤液 | 无色或略带黄色的澄明液体 |
底物液 | 无色或微蓝色澄明液体 |
终止液 | 无色澄明液体,低温条件下可能会出现絮状沉淀 |
1、需要自备的器材
1.1 微量移液器;
1.2 微量移液器配套使用的枪头;
1.3 用来稀释洗涤液的500ml量筒;
1.4 适用于检测96T微孔板的酶标仪;
1.5 用于稀释样品的1.5ml Ep管;
1.6 蒸馏水或去离子水。
2、样品的制备
用样品稀释液将待检血清样品进行40倍稀释(建议:5μl血清样品加入195μl样品稀释液中),样品加入包被板前要充分混匀,稀释不同待检样品注意更换枪头。注意:①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生;②不能稀释阴性、阳性对照。
3、操作步骤 (﹡使用前应轻轻旋转或震荡予以混匀,所有试剂应恢复至室温)
3.1 在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照;
3.2 在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照;
3.3 取100μl经1:40稀释好的待检样品加入相应孔中,并做好记录;
3.4 37℃孵育30min;
3.5 将各孔的液体弃入废液桶,每孔加250μl的洗涤液(试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶,需先溶解后,方可进行稀释)进行洗板,重复3次,每次30s;
﹡加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果,尽量将孔内洗涤液抛甩干净;
3.6 每孔加100μl酶标结合物;
3.7 37℃孵育30min;重复步骤3.5;
3.8 每孔加100μl底物液;
3.9 37℃孵育10min(避光显色);
3.10 每孔加100μl的终止液;
3.11 立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值,即OD450值。
4、试验有效性判断
4.1阴性对照:正常情况下,阴性对照孔OD450值≤0.2;
4.2阳性对照:正常情况下,阳性对照孔OD450值≥0.4;
4.3结果判定:检测样品OD450值≥0.267,判定该检测样品为阳性;检测样品OD450值<0.238,判定该检测样品为阴性;0.238≤检测样品OD450值<0.267为可疑,建议重新样品检测。
【注意事项】
(1)待检血清样品数量过多时,应先使用血清稀释板将所有待检血清稀释完毕后,再统一将血清样品加入酶标板中,使反应时间一致。
(2)试剂盒使用的过程中不要吸烟、喝水和吃东西。
(3)底物液和终止液对皮肤有刺激性,注意防护。
(4)底物液不要暴露于强光和任何氧化剂;使用洁净的玻璃和朔料容器处理底物液。
(5)所有试剂应在2~8℃存放;使用前恢复到室温,使用后放回2~8℃。
(6)注意防止试剂盒组分受到污染。
(7)不要使用超过有效期的试剂,不同批次试剂盒的组分不要混用。
【规格与包装】96T×2
【贮藏与有效期】2~8℃避光保存,有效期为6个月
【联系人】 王金良 电话:0543-3403060
仅供兽医诊断使用
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编辑:熊方方