兔瘟病毒一步法RT-PCR检测试剂盒说明书(20次)

     更新时间:2019-06-10       浏览量:
【注意】  用前请认真阅读注意事项。
【用途】  用于兔瘟病毒病的检测、诊断和流行病学调查。
【试剂】
【操作步骤】
1.RNA提取 

(1) 取疑似兔瘟病毒病的病料(肝、脾脏等)1~4g于无菌研钵,研磨并用Hanks液或PBS稀释成1:3乳剂,分装1.5ml灭菌EP管,反复冻融2~3次,8000r/min离心5分钟。
(2)取200uL上清液(或标准品T),移入新的1.5mL灭菌EP管中,加入200uLSR-I,漩涡振荡混合均匀,静置5min。
(3)加75uL TU-1,漩涡振荡混合均匀,10000r/min离心5 min。
(4)将上清转移到新的2 ml离心管(试剂盒内提供)中,加入300 uL 异丙醇(1%冰乙酸),上下倒置6-8次,混合均匀。
(5)将步骤4中的混合液移入制备管中,并将制备管置于同一2 ml离心管,10000 r/min离心1min。
(6)弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,加500 uL SR-II,室温静置1min,10000 r/min离心1 min。
(7)弃滤液,将制备管置回到2 ml离心管中,加700 uL SR-Ⅲ,10000 r/min离心1 min。
(8)将制备管置回到2 ml离心管中,10000 r/min离心1 min。
(9) 将制备管置于洁净的1.5 ml离心管中(试剂盒内提供),在制备管膜中央加40 uL TU-2, 室温静置1 min。10000 r/min离心1 min洗脱。洗脱液即为模板,即用或-70℃冻存备用。
2.One-Step RT- PCR加样体系
 
反应条件:
4.电泳
配制1%琼脂糖凝胶,取PCR产物5uL混合1uL TU-8,加样于凝胶孔中,同时在相邻孔加3uLTU-7,在120v 电压下,1×TAE液中电泳15分钟,在紫外成像仪下观察结果。

【结果判定】    在约460bp位置出现扩增带,实验结果为阳性(如图)。                             
                 
1.DL2000 Marker     
2.标准阳性片段
【注意事项】
1.每次使用,开盖之前请先瞬时离心,使试剂沉于管底。
2.本试剂盒为20头份量诊断试剂,操作失误或移液器不准确造成最终剂量不够情况,不予负责。
3.尽量建立PCR试验操作区,避免交叉污染,RNA抽提严格防止RNA酶污染,要求戴一次性塑料手套,并经常更换。
4.枪头、离心管和PCR管在使用前,最好用DEPC水(0.1%)处理,然后高压灭菌后烘干,操作过程尽量不要用手接触,可用镊子夹取。
【有效期】                                             
本制品有效期为1年,生产日期见包装侧面。
【联系人】   王金良、管宇            电话:0543-3403060
仅供兽医诊断使用



上一篇:犬细小病毒病PCR检测试剂盒说明书(20次)
下一篇:犬瘟热病一步法RT-PCR检测试剂盒说明书(20次)
编辑:熊方方




最新动态
媒体报道
行业资讯